臺盼藍(lán)染色原理

臺盼藍(lán)（Trypan blue）是一種細(xì)胞活性染料，常用于細(xì)胞計數(shù)和細(xì)胞活力檢測。它可以通過細(xì)胞膜進入細(xì)胞，并與細(xì)胞內(nèi)的核酸結(jié)合，使細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色。對于喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，其細(xì)胞膜通透性增加，臺盼藍(lán)染料可以進入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞染成藍(lán)色。通過觀察被染成藍(lán)色細(xì)胞的數(shù)量，即可得出對應(yīng)的細(xì)胞濃度。

細(xì)胞計數(shù)的操作流程

1-準(zhǔn)備工作

·準(zhǔn)備細(xì)胞懸液：將待檢測的細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)濃度，收集細(xì)胞并制備成細(xì)胞懸液。

·準(zhǔn)備臺盼藍(lán)染料：將0.4臺盼藍(lán)染料用PBS緩沖液稀釋至0.2%。

·準(zhǔn)備細(xì)胞計數(shù)儀和計數(shù)板：使用全自動細(xì)胞計數(shù)儀（JSY-SC-031H）和血細(xì)胞計數(shù)板、蓋玻片進行細(xì)胞計數(shù)。

·準(zhǔn)備移液器和吸頭：使用移液器和吸頭吸取細(xì)胞懸液和臺盼藍(lán)染料。

2-加入臺盼藍(lán)染料

·取適量的細(xì)胞懸液與離心管中。

·加入等量的臺盼藍(lán)染料（0.2%），再用移液槍輕輕吹打混勻。

3-上機檢測

·用移液器取10uL細(xì)胞混合液，加入血細(xì)胞計數(shù)板中。

·將加樣后的血細(xì)胞計數(shù)板放至細(xì)胞計數(shù)儀（JSY-SC-031H）的載物臺上，選擇對應(yīng)的計數(shù)模式，即可開始細(xì)胞計數(shù)分析（濃度計算公式=（四個大方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)之和）/4×（稀釋倍數(shù)）×10⁴）。

4-查看結(jié)果數(shù)據(jù)

計數(shù)完成后，點擊數(shù)據(jù)詳情，查看細(xì)胞濃度、細(xì)胞直徑、細(xì)胞聚團率等數(shù)據(jù)。

注意事項

1-臺盼藍(lán)染料具有一定毒性，操作時需佩戴手套和口罩，避免接觸皮膚和吸入氣體。

2-臺盼藍(lán)染料需避光保存，避免陽光直射。

3-臺盼藍(lán)染料適用于大多數(shù)細(xì)胞類型，但無法很好的區(qū)分細(xì)胞和雜質(zhì)，因此不適用于原代細(xì)胞、PBMC等含有大量雜質(zhì)碎片的細(xì)胞類型。

4-加樣前，可將臺盼藍(lán)靜置數(shù)分鐘，取上層。

5-加樣時，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生，以免影響細(xì)胞計數(shù)的結(jié)果。

臺盼藍(lán)染料是一種常用的細(xì)胞活性染料，可用于細(xì)胞計數(shù)和活力檢測。在使用臺盼藍(lán)染料進行細(xì)胞計數(shù)時，需要注意操作流程和注意事項，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。